Belangrijkste verschil - Capillaire elektroforese versus gelelektroforese
Elektroforese is een techniek die wordt gebruikt om biomoleculen te scheiden op basis van de deeltjeslading, de deeltjesgrootte en de deeltjesvorm. De migratie van het molecuul, bekend als elektroforetische mobiliteit, hangt af van het type polymeer / gel dat wordt gebruikt, de poriegrootte, de geleverde spanning, de looptijd en de verhouding tussen oppervlak en volume. Er zijn verschillende soorten elektroforese-technieken op basis van het type biomolecuul dat wordt gebruikt. Het eerste type elektroforese dat werd uitgevonden, was papierelektroforese waarbij een nitrocellulosepapier werd gebruikt als medium voor het scheiden van biomoleculen. Het principe van gelelektroforese waarbij gels met verschillende poriegrootte werden gebruikt om biomoleculen te scheiden, werd later uitgevonden. Gelelektroforese-techniek werd verder gemodificeerd om de nauwkeurigheid van de techniek te verbeteren, en een dergelijke modificatie is capillaire elektroforese. De belangrijk verschil tussen capillaire elektroforese en gelelektroforese is dat gelelektroforese wordt uitgevoerd in een verticaal of horizontaal vlak met behulp van een polymeergel met standaard poriegrootte, terwijl capillaire elektroforese wordt uitgevoerd in een capillaire buis met een polymeervloeistof of een gel.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is gelelektroforese
3. Wat is capillaire elektroforese
4. Overeenkomsten tussen capillaire elektroforese en gelelektroforese
5. Vergelijking zij aan zij - Capillaire elektroforese versus gelelektroforese in tabelvorm
6. Samenvatting
Wat is gelelektroforese?
Gelelektroforese is een techniek die wordt gebruikt om voornamelijk nucleïnezuren, eiwitten of aminozuren te scheiden op basis van hun lading, grootte en vorm. Deze techniek maakt gebruik van een fysische gel, een polymere stof, als scheidingsmedium. De meest gebruikte gels zijn agarose (voor nucleïnezuurscheiding) en polyacrylamide (voor eiwitscheiding). Het gelelektroforetische apparaat bevat de gel-gietbak om de gel voor te bereiden, gietkammen om de putten voor te bereiden, buffertank, elektroden - positief (anode) en negatief (kathode) en de voedingseenheid. Moleculen zoals DNA of RNA, die negatief geladen zijn, verplaatsen zich van de kathode naar de anode en moleculen die positief geladen zijn, bewegen vice versa. Gelvoorbereiding gebeurt volgens de vereisten. Als een hoge resolutie of scheiding van moleculen vereist is,een gel met een hoge concentratie met een kleinere poriegrootte moet worden bereid. De moleculen die op de gelmatrix zijn gescheiden, worden waargenomen na een kleuringstechniek. De gescheiden moleculen verschijnen als banden op de gelmatrix.
Figuur 01: Gelelektroforese
Gelelektroforese wordt gebruikt bij moleculaire diagnostiek zoals DNA-vingerafdrukken om de aanwezigheid van een bepaald DNA / RNA-fragment of een eiwit te bepalen. Gelelektroforese bepaalt ook de zuiverheid van het geëxtraheerde biomolecuulmonster. Gelelektroforese wordt uitgevoerd als een voorbereidende stap voor in en hybridisatie en als een bevestigingsanalyse na sequentiebepaling.
Wat is capillaire elektroforese?
Capillaire elektroforese is een modificatie van gelelektroforese die hetzelfde principe van scheiding gebruikt op basis van lading, grootte van het molecuul, maar wordt uitgevoerd in een capillaire buis met een gelsubstantie of een vloeibaar polymeer. Capillairen zijn gemaakt van gesmolten silica en elk capillair buisje heeft een inwendige diameter van 50-100 μm en is 25-100 cm lang. Monsters worden geïnjecteerd in de capillaire buis die het polymeermateriaal bevat en worden veel sneller gescheiden dan de conventionele gelelektroforese. Het capillaire systeem is goed beschermd in een isolatiemantel die het monster tegen elke besmetting beschermt. Capillairen kunnen worden gevuld met vloeibare polymeren zoals hydroxyethylcellulose of gels met hoge resolutie zoals polyacrylamide. Capillaire elektroforese zorgt voor een grotere resolutie; vandaar dat de scheiding nauwkeuriger is. Capillaire elektroforese maakt gebruik van een geautomatiseerd detectorsysteem via spectrofotometrische analyse. Dit komt door de grotere verhouding tussen oppervlak en volume.
Figuur 02: Capillaire elektroforese
Capillaire elektroforese wordt gebruikt in situaties zoals in forensisch onderzoek waar een hogere nauwkeurigheid vereist is en wordt niet vaak gebruikt omdat het een kostbare techniek is.
Wat zijn de overeenkomsten tussen capillaire elektroforese en gelelektroforese?
- Scheiding van moleculen in beide technieken is gebaseerd op de lading en grootte van het molecuul.
- Beide technieken kunnen worden gebruikt om zowel nucleïnezuren als eiwitten te scheiden.
- Het monstervolume van beide technieken is hetzelfde.
- Beide technieken gebruiken een buffer om scheiding te vergemakkelijken.
Wat is het verschil tussen capillaire elektroforese en gelelektroforese?
Diff Artikel Midden voor Tafel
Capillaire elektroforese versus gelelektroforese |
|
| Capillaire elektroforese is een techniek die biomoleculen op een capillaire buis scheidt met behulp van een vloeibaar of gelpolymeer medium. | Gelelektroforese is een techniek die biomoleculen op een verticaal of horizontaal vlak scheidt met behulp van een polymeergelmedium. |
| Scheiding | |
| Bij capillaire elektroforese vindt scheiding plaats in een capillaire buis. | Bij gelelektroforese vindt scheiding plaats op een verticaal of horizontaal vlak. |
| Medium van scheiding | |
| Vloeibare polymeren zoals hydroxyethylcellulose worden gebruikt bij capillaire elektroforese. | Gels, ofwel agarose of polyacrylamide, worden gebruikt als medium bij gelelektroforese. |
| Cross Linkage | |
| Hoge resolutie kan worden verkregen uit capillaire elektroforese. | De resolutie is laag bij gelelektroforese. |
| Verhouding oppervlakte tot volume | |
| De verhouding tussen oppervlak en volume is hoog bij capillaire elektroforese. | De verhouding tussen oppervlak en volume is laag bij gelelektroforese. |
| Detectietechniek | |
| Detectie gebeurt door middel van spectrofotometrische geautomatiseerde detectoren in capillaire elektroforese. | Het kleuren en observeren door middel van UV-transilluminator worden gedaan als detectietechnieken in gelelektroforese. |
Samenvatting - Capillaire elektroforese versus gelelektroforese
Moleculaire diagnostiek speelt een grote rol in de wetenschappelijke wereld. Identificatie en zuivering van DNA, RNA en eiwitten zijn cruciale stappen in de diagnostische procedures. Elektroforese is een techniek die biomoleculen scheidt en identificeert in zowel gelelektroforese als de veel gevorderde capillaire gelelektroforese. Gelelektroforese wordt uitgevoerd in een verticaal of horizontaal vlak met behulp van een polymeergel met standaard poriegrootte, terwijl capillaire elektroforese wordt uitgevoerd in een capillaire buis met een polymeervloeistof of een gel. Dit is het verschil tussen capillaire elektroforese en gelelektroforese. Na voltooiing van de elektroforese-techniek worden de biomoleculen verder verwerkt om informatie op een hoger niveau te verkrijgen via hybridisatie of via technieken zoals vingerafdrukken.
Download de pdf-versie van capillaire elektroforese versus gelelektroforese
U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en voor offline doeleinden gebruiken volgens de citatienota. Download hier de pdf-versie. Verschil tussen gelelektroforese en capillaire elektroforese.
