Belangrijkste verschil - Phusion versus Taq-polymerase
DNA-polymerasen zijn veel gebruikte enzymen in moleculaire biologietechnieken en zijn ook van nature aanwezig in alle organismen die DNA-replicatie ondergaan. Het zijn de belangrijkste polymeriserende enzymen die bij replicatie betrokken zijn. DNA-polymerase is in staat nucleotiden toe te voegen aan het vrije 3'-uiteinde van de DNA-streng, waardoor een nieuwe streng wordt verlengd. Momenteel is het, als gevolg van de ontwikkelingen in de moleculaire biologie in ziektediagnostiek en industriële toepassingen, belangrijk om polymerasen te vervaardigen met verschillende gunstige eigenschappen. Dit verhoogt de nauwkeurigheid van de methode en maakt het een snellere techniek. Phusion en Taq-polymerase zijn twee commercieel geproduceerde thermostabiele polymerase-enzymen die worden gebruikt in speciale moleculaire toepassingen. Phusion is een DNA-polymerase geïsoleerd uit Pyrococcus furiosus en wordt voornamelijk gebruikt in kloneringsexperimenten om de betrouwbaarheid te vergroten. Taq DNA-polymerase is het standaard DNA-polymerase dat wordt gebruikt in de polymerase-kettingreactie (PCR), en het wordt geïsoleerd uit de thermostabiele bacterie; Thermus aquaticus. Het belangrijkste verschil tussen de twee enzymen is het bron-micro-organisme. Phusion wordt geïsoleerd uit de extremofiel, Pyrococcus furiosus, terwijl Taq-polymerase wordt geïsoleerd uit de thermofiel, Thermus aquaticus. Taq-polymerase wordt geïsoleerd uit de thermofiele Thermus aquaticus. Taq-polymerase wordt geïsoleerd uit de thermofiele Thermus aquaticus.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is Phusion
3. Wat is Taq Polymerase
4. Overeenkomsten tussen Phusion en Taq Polymerase
5. Vergelijking zij aan zij - Phusion versus Taq Polymerase in tabelvorm
6. Samenvatting
Wat is Phusion?
Phusion DNA-polymerase is een nieuw polymerase dat wordt vervaardigd door het enzym te isoleren uit Pyrococcus furiosus, een extremofiel Archaea. Deze microben verblijven in extreem hoge temperatuuromstandigheden, waardoor het polymerase een zeer hittestabiele polymerase wordt. Fusiepolymerase wordt gebruikt om extreme betrouwbaarheid te verkrijgen ten opzichte van het conventionele thermostabiele polymerase; Taq-polymerase. Phusiepolymerase kan lange sjablonen tot 7,5 kb genomisch DNA amplificeren. De optimale polymerisatiecapaciteit van Phusion-polymerase is 72 ° C. Phusion wordt ook gebruikt bij het klonen van producten voor sequentiebepaling, expressieanalyse en mutatieanalyse.
Phusion DNA-polymerase heeft de 3 '- 5' exonuclease-activiteit. Dit maakt proeflezen van de nieuw gesynthetiseerde streng na de synthese mogelijk. Vandaar dat de nucleotide-mismatches gemakkelijk kunnen worden gerepareerd. Het heeft dus een lager foutenpercentage. De algemene voordelen van Phusion-polymerase zijn;
- Extreme trouw
- Hoge snelheid en kortere verlengingstijd
- Robuuste reacties en vereist minimale optimalisatie
- Hoge opbrengst
Figuur 01: Phusion
Het belangrijkste nadeel van Phusion-polymerase is dat het wordt geremd in aanwezigheid van deoxyuridinetrifosfaat (dUTP). Wanneer dUTP's zich ophopen in het reactiemengsel, kan dit de werking van Phusion-polymerase remmen. Dit wordt voorkomen door het reactiemengsel te behandelen met dUTPase voordat het enzym wordt toegevoegd. Momenteel wordt een dUTP-resistente variant van Phusion-polymerase, bekend als Pfu Turbo, gebruikt in plaats van Phusion-polymerase als oplossing voor dit probleem.
Wat is Taq-polymerase?
Taq DNA-polymerase-uitvinding heeft een revolutie teweeggebracht op het gebied van moleculaire biologie. Het loste een groot probleem op bij de DNA-amplificatie. Taq DNA-polymerase is een hittebestendig polymerase-enzym dat wordt geëxtraheerd en geïsoleerd uit de thermofiele bacterie Thermus aquaticus. De ontdekking van deze enzymen leidt tot de ontwikkeling van de PCR. Dit enzym heeft het gebruik van polymerasekettingreactie bij DNA-amplificatie mogelijk gemaakt in plaats van conventionele omslachtige kloneringstechnieken. PCR wordt nu gebruikt in moleculaire diagnostiek, landbouw en industriële velden en er zijn veel nieuwe variaties aan de techniek toegevoegd.
Figuur 02: Taq-polymerase
Taq DNA-polymerase functioneert bij het optimale temperatuurbereik tussen 72 0 C - 80 0 C. Taq DNA-polymerase vereist een cofactor; magnesium vanwege zijn functie. Taq-polymerase heeft niet het 3 '- 5' proefleesvermogen, daarom is het foutpercentage van Taq DNA-polymerase hoog in vergelijking met nieuwere typen DNA-polymerasen zoals Phusion-polymerase enz. Maar de populariteit van Taq DNA-polymerase blijft het hetzelfde in de wetenschappelijke wereld vanwege het gemak en de flexibiliteit van het enzym.
Wat zijn de overeenkomsten tussen Phusion en Taq-polymerase?
- Zowel Phusion- als Taq-polymerase-enzymen zijn polymeriserende enzymen die nucleotiden kunnen toevoegen aan het 3'-vrije uiteinde van de DNA-streng.
- Zowel Phusion- als Taq-polymerasen vereisen een primersequentie om polymerisatie te initiëren.
- Zowel Phusion- als Taq-polymerasen zijn hittestabiel.
- Zowel Phusion- als Taq-polymerasen worden gebruikt in PCR-mechanismen om DNA te amplificeren.
- Wanneer het polymerase aan het reactiemengsel wordt toegevoegd, worden zowel Phusion- als Taq-polymerasen als laatste toegevoegd om de efficiëntie van het enzym te waarborgen.
- Zowel Phusion- als Taq-polymerasen worden commercieel gesynthetiseerd voor experimentele doeleinden in de moleculaire biologie.
- Zowel Phusion- als Taq-polymerasen hebben een cofactor nodig om hun functie te voltooien.
Wat is het verschil tussen Phusion en Taq Polymerase?
Diff Artikel Midden voor Tafel
Phusion versus Taq-polymerase |
|
| Phusion is een DNA-polymerase geïsoleerd uit Pyrococcus furiosus en wordt voornamelijk gebruikt in kloneringsexperimenten om de betrouwbaarheid te vergroten. | Taq DNA-polymerase is het standaard DNA-polymerase dat wordt gebruikt in de Polymerase Chain Reaction (PCR), en het wordt geïsoleerd uit de thermostabiele bacterie Thermus aquaticus. |
| Bronorganisme | |
| Phusion wordt gewonnen uit extremofiele archaea - Pyrococcus furiosus. | Deze literaire werken strekken zich uit van de kolonisatieperiode tot de dekolonisatieperiode. |
| Proefleesvermogen | |
| 3 '- 5' proefleesvermogen is aanwezig in Phusion. | 3 '- 5' proefleesvermogen is afwezig in Taq-polymerase. |
| Trouw | |
| High fidelity is er met Phusion. | Taq-polymerase vertoont een lage betrouwbaarheid. |
| versterking | |
| Phusion is in staat lange DNA-fragmenten te amplificeren. | Taq-polymerase is in staat om veel kortere DNA-fragmenten te amplificeren. |
| dUTP-vergiftiging | |
| De fusie-actie wordt geremd door de oneven accumulatie. | Taq-polymerase wordt niet geremd door dUPT. |
Samenvatting - Phusion versus Taq-polymerase
Phusion en Taq DNA-polymerase zijn twee hittebestendige polymerasen die worden gebruikt in PCR-technieken. Phusion is een polymerase geïsoleerd uit de extremofiel, Pyrococcus furiosus, terwijl Taq is geïsoleerd uit de thermostabiele bacterie Thermus aquaticus. De ontdekking van Taq-DNA-polymerase leidt tot de PCR-uitvinding. Phusion heeft veel voordelen ten opzichte van Taq, waardoor Phusion een betere optie is geworden voor het produceren van high-fidelity DNA. Taq-polymerase wordt echter nog steeds gebruikt als het standaardpolymerase-enzym in PCR. Dit is het verschil tussen Phusion en Taq-polymerase.
