Belangrijkste verschil - Gel stapelen versus scheidende gel
De termen stapelgel en scheidingsgel worden gebruikt bij het uitleggen van de SDS-PAGE-techniek. SDS-PAGE of natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om eiwitmoleculen te scheiden op basis van hun molecuulgewichten. De theorie achter de techniek is dat eiwitten met verschillende molecuulgewichten verschillende migratiesnelheden vertonen; moleculen met een laag molecuulgewicht migreren sneller, terwijl moleculen met een hoog molecuulgewicht langzaam migreren. Het medium voor migratie is een gel. Er zijn twee soorten gels genaamd stapelgel en scheidingsgel. Het belangrijkste verschil tussen stapelgel en scheidingsgel is dat de pH van de stapelgel 6,8 is, terwijl de pH van de scheidingsgel 8,8 is.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is stapelingsgel
3. Wat is scheidingsgel
4. Relatie tussen stapelgel en scheidingsgel
5. Vergelijking zij aan zij - Gel stapelen versus scheidingsgel in tabelvorm
6. Samenvatting
Wat is Stacking Gel?
Stapelgel is een laaggeconcentreerde polyacrylamidegel die op de meer geconcentreerde oplossende gel (scheidingsgel) wordt geplaatst in de SDS-PAGE-techniek. De stapelgel wordt gebruikt om de resolutie van elektroforese te verbeteren. De resolutie neemt toe vanwege het verschil tussen concentraties stapelgel en oplossende gel die van invloed zijn op de eiwitten in het monster. Omdat de concentratie van polyacrylamide in stapelgel laag is, is de poriegrootte groter. Dit helpt ook bij het vergroten van de scheiding.
De stapelgel is een losse polyacrylamidegel met grote poriën van ongeveer 7% polyacrylamide. Deze poriën vormen geen aanzienlijke barrière voor grote eiwitmoleculen. Daarom heeft deze gel een licht effect op de mobiliteit van die eiwitten. Dit maakt scheiding op basis van de mobiliteit en grootte van eiwitten door ze tussen twee gels te concentreren.
Figuur 01: SDS-PAGE Acrylamide Gel
De pH van de stapelgel is 6,8. De pH is zuurder dan die van het oplossen van gel door 2 pH-eenheden. Deze pH impliceert een lagere ionsterkte en dus een hogere elektrische weerstand. Dit veroorzaakt de mobiliteit van eiwitten dan andere geladen deeltjes die in de gel aanwezig zijn.
Wat is scheidingsgel?
Scheidingsgel of oplossende gel van een SDS-PAGE-techniek is een sterk geconcentreerde polyacrylamidegel die bovenop laag geconcentreerde stapelgel wordt geplaatst. De scheidingsgel bevat een hoog gehalte aan polyacrylamide (10%). De pH van deze gel wordt gehandhaafd op pH = 8,8, wat een hogere pH-waarde is dan die van de stapelgel.
Figuur 02: Een gelelektroforese-apparaat
Wanneer de eiwitmoleculen de scheidingsgel bereiken, wordt de migratie van die moleculen vertraagd omdat de scheidingsgel een gel met een hoge concentratie is met een kleine poriegrootte die kan dienen als een aanzienlijke barrière voor de beweging van de eiwitmoleculen. Door deze vertraging kunnen de andere eiwitten langzaam migreren, wat resulteert in een smalle, geconcentreerde band tussen de twee gels.
Wat is de relatie tussen stapelgel en scheidingsgel?
Zowel Stacking Gel als Separating Gel-typen worden in hetzelfde apparaat gebruikt
Wat is het verschil tussen Stacking Gel en Separating Gel?
Diff Artikel Midden voor Tafel
Gel stapelen versus scheidende gel |
|
| Stapelgel is een laaggeconcentreerde polyacrylamidegel die op de meer geconcentreerde oplossende gel (scheidingsgel) wordt geplaatst in de SDS-PAGE-techniek. | Scheidingsgel of oplossende gel van een SDS-PAGE-techniek is een sterk geconcentreerde polyacrylamidegel die bovenop een laaggeconcentreerde stapelgel wordt geplaatst. |
| Plaatsing | |
| Stapelgel wordt op de oplossende (scheidende) gel geplaatst. | Scheidingsgel wordt op de bodem van de container geplaatst die wordt gebruikt voor gelelektroforese. |
| Concentratie | |
| De concentratie stapelgel is hoog. | De concentratie scheidingsgel is laag. |
| Polyacrylamide-inhoud | |
| Stapelgel bevat ongeveer 7% polyacrylamide. | Scheidingsgel bevat ongeveer 10% polyacrylamide. |
| pH | |
| De pH van de stapelgel is 6,8. | De pH van de scheidende gel is 8,8. |
| Porie grootte | |
| Grote poriegroottes zijn aanwezig in stapelgel. | Kleine poriegroottes zijn aanwezig in scheidingsgel. |
| Resolutie | |
| Stapelgel geeft een betere resolutie. | Scheidende gel geeft een slechte resolutie. |
Samenvatting - Gel stapelen versus scheidende gel
Stapelgel en scheidingsgel zijn twee soorten polyacrylamidegels die worden gebruikt om een betere scheiding van eiwitmoleculen in een bepaald monster te krijgen. Het verschil tussen stapelgel en scheidingsgel is dat de pH van de stapelgel 6,8 is, terwijl de pH van de scheidingsgel 8,8 is.
