Belangrijkste verschil - Warm versus koud trypsinisatie
Warme en koude trypsinisatie zijn twee methoden die worden gebruikt bij de enzymatische desaggregatie van cellen bij het kweken van dierlijke cellen. Het belangrijkste verschil tussen warme en koude trypsinisatie, zoals de namen suggereren, hangt af van de temperatuur waarbij de trypsine wordt toegevoegd voor cellulaire desaggregatie. Warme trypsinisatie vindt plaats onder hogere temperatuuromstandigheden (36,5 - 37 0 C) terwijl koude trypsinisatie plaatsvindt onder lage temperatuuromstandigheden.
Tijdens het proces van primaire celkweek van dierlijke cellen worden er drie hoofdmethoden gebruikt en deze zijn succesvol gebleken. De drie methoden omvatten mechanische desaggregatie van cellen, enzymatische desaggregatie van cellen en de primaire explantatietechniek. De enzymatische desaggregatie van cellen die leidt tot de isolatie van cellen en het wordt gedaan door het eiwitafbrekende enzym trypsine. Daarom staat dit proces bekend als trypsinisatie. Trypsinisatie kan worden gedaan onder twee verschillende omstandigheden, namelijk warme trypsinisatie en koude trypsinisatie. Warme trypsinisatie is de methode om de cellen te behandelen met trypsine onder warme omstandigheden bij een temperatuur van 36,5 - 37 0C. Koude trypsinisatie is het proces van trypsinebehandeling dat plaatsvindt onder koudere omstandigheden, bij voorkeur in ijs dat zeer lage temperaturen handhaaft.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is warme trypsinisatie
3. Wat is koude trypsinisatie
4. Overeenkomsten tussen warme en koude trypsinisatie
5. Vergelijking zij aan zij - warme versus koude trypsinisatie in tabelvorm
6. Samenvatting
Wat is warme trypsinisatie?
Trypsinisatie kan worden gedaan om de cellulaire componenten te disaggregeren om de cellen te isoleren om een primaire celkweek te produceren. Trypsine is een eiwitafbraakenzym en het enzymmengsel dat bij de trypsinisatie wordt gebruikt, kan een ruw extract of een gezuiverd product zijn. Van het ruwe extract wordt gezegd dat het efficiënter is bij eiwitlysis en celdesintegratie, omdat het andere afbrekende enzymen bevat.
Warmtrypsinisatie is de meest gebruikte enzymatische methode voor celdesaggregatie die plaatsvindt onder hogere temperatuuromstandigheden. Voorafgaand aan de behandeling door middel van trypsinisatie wordt het gewenste weefsel in kleinere stukjes gehakt. Het vergemakkelijkt het gemakkelijke desaggregatieproces. Het gehakte weefsel wordt vervolgens gewassen in een speciaal medium dat bekend staat als het Dissection Basal Salt-medium.
Na voltooiing van de wasstap worden de cellen getransformeerd in een kolf met daarin het actieve enzym, dat trypsine is. Omdat deze techniek een warm trypsinisatieprotocol impliceert, wordt de trypsine gedurende ongeveer vier uur op een temperatuur van ongeveer 37 ° C geplaatst.
Figuur 01: Trypsine
De inhoud wordt gemengd en geschud met behulp van centrifugatiemethoden voor het gemak van het protocol en om het desaggregatieproces te versnellen. Zodra de aanbevolen tijd is bereikt, kunnen de cellen worden afgeleid uit het supernatant. De cellen die uit het supernatant zijn afgeleid, worden vervolgens bij een bepaalde temperatuur en tijd geïncubeerd.
Wat is koude trypsinisatie?
Koude trypsinisatie is het andere type trypsinisatie dat plaatsvindt onder koude omstandigheden. Bij deze techniek worden de gehakte en gewassen cellen in flesjes op ijs geplaatst en vervolgens gedrenkt in trypsine. De weekperiode is veel langer - ongeveer 6 - 24 uur.
Na voltooiing van de weekprocedure wordt de trypsine verwijderd uit het cellysaat en worden de weefselstukjes verder ongeveer 20 - 30 minuten bij 37 ° C geïncubeerd. De desaggregatie van de cellen wordt bewerkstelligd door herhaaldelijk pipetteren van het weefselmengsel. Hierdoor kunnen de cellen zich losmaken van het membraan en naar het supernatant komen. Zodra de cellen zich in het supernatant bevinden, worden ze geïncubeerd en gekweekt bij een gewenste temperatuur en tijdsperiode.
De koude trypsiniseringsmethode heeft verschillende voordelen
- Hogere opbrengst van levensvatbare cellen omdat de celschade wordt geminimaliseerd. De celbeschadiging wordt geminimaliseerd door geen centrifugatiestappen te gebruiken.
- Zeer handige methode.
- Minder bewerkelijk.
De belangrijkste beperking van de koude trypsiniseringsmethode is dat grote hoeveelheden niet in één keer kunnen worden gebruikt.
Wat zijn de overeenkomsten tussen warme en koude trypsinisatie?
- Zowel warme als koude trypsinisatieprocessen gebruiken het enzym trypsine voor het opsplitsen van cellen.
- Zowel warme als koude trypsinisatieprocessen worden gebruikt in celkweekprocedures voor het uit elkaar halen van cellen.
- Bij zowel warme als koude behandelingsprocedures met trypsine worden de cellen afgeleid van het supernatant.
Wat is het verschil tussen warme en koude trypsinisatie?
Diff Artikel Midden voor Tafel
Warm versus koud trypsinisatie |
|
| Warme trypsinisatie is de werkwijze voor het behandelen van de cellen met trypsine onder warme omstandigheden bij een temperatuur van 36,5-37 0. | Koude trypsinisatie is het proces van trypsinebehandeling dat plaatsvindt onder koudere omstandigheden, bij voorkeur in ijs dat zeer lage temperaturen handhaaft. |
| Protocol | |
| De stukjes weefsel worden tijdens de procedure continu op 37 ° C gehouden. | De stukjes weefsel worden eerst op ijskoude temperaturen gehouden en daarna op 37 ° C. |
| Temperatuur | |
| Warme trypsinisatie vindt plaats bij 36,5 - 37 0 | Koude trypsinisatie vindt plaats bij ijskoude temperaturen. |
| Tijd verbruikt | |
| Minder tijd nodig voor het hele proces (ongeveer 4 uur) van warme trypsinisatie. | Langere tijd nodig (ongeveer 6 - 24 uur) voor koude trypsinisatie. |
| Opbrengst van levensvatbare cellen | |
| Laag in warme trypsinisatie. | Hoog in koude trypsinisatie. |
| Gebruik van centrifugeren | |
| Centrifugeren is vereist voor het opsplitsen van cellen bij warme trypsinisatie. | Centrifugeren is niet vereist bij koude trypsinisatie. |
| Initiële hoeveelheid weefsel voor trypsinisatie | |
| Bij warme trypsinisatie kan een grotere hoeveelheid weefsel worden gebruikt. | Bij koude trypsinisatie kan een kleinere hoeveelheid weefsel worden gebruikt. |
| Cel schade | |
| Hoog door centrifugeren bij warme trypsinisatie. | Minder door koude trypsinisatie. |
Samenvatting - Warm versus koud trypsinisatie
Trypsinisatie is de methode waarbij het proteïne-afbrekende enzym trypsine wordt gebruikt voor de disaggregatie en bereiding van primaire celculturen tijdens het celkweekproces. Er zijn twee hoofdtechnieken voor trypsinisatie op basis van de temperaturen die tijdens de procedure worden gebruikt. Het zijn warme en koude trypsinisatie. Warme trypsinisatie wordt uitgevoerd bij 37 ° C, terwijl koude trypsinisatie wordt uitgevoerd onder ijskoude omstandigheden. Hoewel koude trypsinisatie meer tijd nodig heeft voor voltooiing, wordt er gezegd dat het een hogere opbrengst aan levensvatbare cellen heeft. Dit is te wijten aan het feit dat celschade tot een minimum wordt beperkt bij koude trypsinisatie, aangezien er geen krachtige centrifugatiestappen worden gebruikt. Dit is het verschil tussen warme en koude trypsinisatie.
