Belangrijkste verschil - SDS-pagina versus native pagina
SDS en native page zijn twee soorten polyacrylamidegelelektroforese-technieken die worden gebruikt in Molecular Biology. Het belangrijkste verschil tussen SDS-pagina en Native Page is het type polyacrylamidegel dat wordt gebruikt. In SDS-pagina wordt daarom een denaturerende gel gebruikt, moleculen worden gescheiden op basis van hun molecuulgewicht. In tegenstelling hiermee worden in Native Page niet-denaturerende gels gebruikt. Daarom worden moleculen gescheiden op basis van hun grootte, lading en vorm.
Polyacrylamidegelelektroforese (pagina) maakt gebruik van een gel die is gemaakt door acrylamidemonomeren te polymeriseren met methyleenbisacrylamide. Het polyacrylamide is taaier en hittebestendig dan agarose. De polyacrylamidegels hebben een kleinere poriegrootte die een efficiënte scheiding van eiwitten mogelijk maakt. Er zijn twee hoofdtypen pagina-instellingen, namelijk SDS-pagina en Native Page. SDS-pagina of natrium-dodecylsulfaat Polyacrylamidegelelektroforese scheidt eiwitten op basis van hun molecuulgewichten. Denaturerende gels worden gebruikt op de SDS-pagina. Native Page gebruikt niet-denaturerende gels en scheidt eiwitten op basis van hun grootte, lading en vorm (3D-conformatie).
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is SDS-pagina
3. Wat is de oorspronkelijke pagina
4. Overeenkomsten tussen de SDS-pagina en de oorspronkelijke pagina
5. Vergelijking zij aan zij - SDS-pagina versus oorspronkelijke pagina in tabelvorm
6. Samenvatting
Wat is een SDS-pagina?
SDS-pagina is de meest gebruikte elektroforetische techniek om eiwitten te scheiden op basis van hun molecuulgewicht. De gel wordt gemaakt door SDS (natriumdodecylsulfaat) toe te voegen, wat een wasmiddel is. SDS prothesen eiwitten in monomeren. SDS is een anionisch wasmiddel. Daarom voegt het een netto negatieve lading toe aan de eiwitten binnen een breed pH-bereik. Wanneer de netto negatieve lading op de eiwitmoleculen wordt gegeven, worden vanwege de ladingsvariatie de complexe structuren afgebroken. Door de negatieve lading trekken eiwitten naar het positieve uiteinde. Moleculen met een lager molecuulgewicht verplaatsen zich dus sneller op de gelmatrix en kunnen dicht bij de anode worden waargenomen, terwijl de eiwitten met een hoger molecuulgewicht dichter bij de putjes worden waargenomen.
Figuur 01: SDS-pagina
De SDS-binding aan de polypeptideketen is evenredig met zijn relatieve molecuulmassa. Daarom kan de molecuulmassa ook worden bepaald via SDS-pagina. De kleuring van de SDS Page-gels wordt gedaan door middel van broomfenolblauwkleuring. Toepassingen van SDS-paginabereik in grotere mate waar het kan worden gebruikt om de relatieve molecuulmassa te schatten en om de relatieve overvloed aan eiwitten in een eiwitmengsel te bepalen. SDS-pagina kan ook worden gebruikt om de eiwitverdeling in een mengsel van eiwitten te bepalen. SDS-pagina wordt ook toegepast om eiwitten te zuiveren en te beoordelen. Het wordt gebruikt als een voorlopige procedure voor western blotting en hybridisatie, die op zijn beurt wordt gebruikt voor het in kaart brengen en identificeren van eiwitten.
Wat is native pagina?
Native Polyacrylamide-gelelektroforese (Native Page) maakt gebruik van een niet-denaturerende gel. Daarom wordt SDS of enig ander denaturerend middel niet aan de gelmatrix toegevoegd. In Native Page is de scheiding van eiwitten gebaseerd op de lading en de grootte van het eiwit. Daarom hangt de mobiliteit van het eiwit af van de lading en de grootte van het eiwit.
De lading van het eiwit hangt af van de zijketens van de aminozuren. Als de zijketens negatief geladen zijn, krijgt het eiwit een algehele negatieve lading en vice versa. Eiwitten behouden een 3D-conformatie door de vouwing die plaatsvindt. Vouwresultaten van de verschillende bindingstypen in eiwitten zoals disulfidebindingen, hydrofobe interacties en waterstofbindingen. Daarom, als de oorspronkelijke pagina bij een neutrale pH wordt gedragen, zullen de eiwitten worden gescheiden volgens de moleculaire vorm van het eiwit. Daarom kan Native Page worden gebruikt als een gevoelige techniek om de verandering in lading of conformatie van het eiwit te detecteren.
Het belangrijkste voordeel van native Page is dat het eiwit dat voor de Page-analyse wordt gebruikt, na de Page-analyse in zijn oorspronkelijke staat kan worden hersteld, aangezien het eiwit tijdens het proces niet wordt verstoord. Native Page is een techniek met een relatief hoge doorvoersnelheid en de stabiliteit van het eiwit wordt verhoogd.
Figuur 02: Native pagina
Na voltooiing van de gelrun kan de Native Page-gel worden bekeken door te kleuren met broomfenolblauw of een ander geschikt kleuringsreagens. De toepassingen van Native Page omvatten scheiding van zure proteïnen, waaronder glycoproteïnen zoals humaan recombinant erytropoëtine, of de identificatie van proteïnen die aanwezig zijn in Bovine Serum Albumine (BSA).
Wat zijn de overeenkomsten tussen SDS-pagina en native pagina?
- Zowel SDS Page- als Native Page-systemen gebruiken polyacrylamidegel als de matrix van de gel.
- Beide worden gebruikt voor het scheiden en identificeren van eiwitten.
- Beiden gebruiken elektroforetische mobiliteit om de verbindingen te scheiden.
- Beide kunnen op een verticale of horizontale manier worden gedaan (meestal gedaan als verticale pagina-instellingen omdat de oplage langer is).
- Het elektroforese-apparaat inclusief de gel-tank, kammen, de voeding is vereist voor de werking van beide technieken.
- Het visualiseren van de gel kan worden gedaan door middel van kleuringsmethoden in beide technieken.
Wat is het verschil tussen SDS-pagina en native pagina?
Diff Artikel Midden voor Tafel
SDS-pagina versus native pagina |
|
| SDS-pagina of natriumdodecylsulfaat pagina scheidt eiwitten op basis van hun molecuulgewicht en gebruikt een denaturerende gel. | Native Page gebruikt niet-denaturerende gels en scheidt eiwitten op basis van hun grootte, lading en vorm (3D-conformatie). |
| Type gel | |
| Een denaturerende gel wordt gebruikt in de SDS-pagina. | Op de oorspronkelijke pagina wordt een niet-denaturerende gel gebruikt. |
| Aanwezigheid van SDS | |
| SDS is aanwezig als wasmiddel om een negatieve lading op het monster op de SDS-pagina te geven. | SDS is niet aanwezig op de oorspronkelijke pagina. |
| Scheidingsbasis | |
| Scheiding van eiwitten hangt af van het molecuulgewicht van het eiwit op de SDS-pagina. | Scheiding hangt af van de grootte en vorm van het eiwitmolecuul op de oorspronkelijke pagina. |
| Stabiliteit van het eiwit | |
| De stabiliteit van het eiwit is laag op de SDS-pagina. | De stabiliteit van proteïne is hoog op de oorspronkelijke pagina. |
| Herstel van de oorspronkelijke proteïne | |
| Niet mogelijk omdat het is gedenatureerd op de SDS-pagina. | Mogelijk op de native pagina. |
Samenvatting - SDS-pagina versus native pagina
SDS-pagina en Native Page zijn twee soorten polyacrylamidegelelektroforese-technieken die worden gebruikt om eiwitten te scheiden. SDS-pagina is behandeld met een detergent genaamd SDS. SDS geeft een algehele negatieve lading aan het eiwit, wat vervolgens resulteert in de denaturatie van het eiwit. Daarom worden de eiwitten gescheiden op basis van hun molecuulgewicht. De Native Page-techniek daarentegen gebruikt geen denaturerend middel. De eiwitten worden dus ofwel gescheiden op basis van hun grootte of vorm. Dit is het verschil tussen SDS-pagina en native pagina.
