Belangrijkste verschil - klonen versus subklonen
Klonen en subklonen zijn moleculair biologische procedures die genetisch identieke cellen of organismen creëren die het DNA of gen dragen dat van belang is. Klonen is een techniek waarbij het geïnteresseerde gen of DNA in een vector wordt ingebracht, het binnen een gastheerbacterie wordt gerepliceerd en waarbij cellen of organismen worden geproduceerd die exacte kopieën zijn van de genetische samenstelling. Subklonen is een techniek waarbij het gen van belang, dat al in een vector is ingebracht, in een secundaire vector wordt ingevoegd, het wordt gerepliceerd in een gastheerbacterie en waarbij genetisch identieke kopieën van cellen of organismen worden geproduceerd. Het belangrijkste verschil tussen klonen en subklonen is dat, bij het klonen, het gen van belang, eenmaal geligeerd in een vector, het kloneringsproces voortzet terwijl, bij het subklonen,het reeds gekloneerde gen van belang wordt gescheiden van de oudervector en opnieuw in een ontvangende vector ingevoegd en gaat door met het proces.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is klonen
3. Wat is subklonen
4. Vergelijking zij aan zij - klonen versus subklonen
5. Samenvatting
Wat is klonen?
Klonen is de procedure waarbij genetisch identieke organismen of cellen worden geproduceerd. In de natuur gebeurt klonen door middel van aseksuele voortplanting. Als er geen genetische recombinatie of wijziging is, krijgen dochtercellen dezelfde genetische samenstelling van de ouder. Prokaryote en eukaryote organismen creëren klonen door binaire splitsing, knopvorming, mitose, enz. In de moleculaire biologie is het klonen van genen of specifieke fragmenten van DNA een populaire methode om de structuur en functie van die specifieke DNA-sectie te bestuderen.
Het hoofddoel van moleculair klonen is om miljoenen kopieën te maken van genetisch identieke cellen of organismen die het betreffende DNA-fragment dragen (voornamelijk genen). Het creëert organismen met exacte genetische kopieën van een ander. In de eerste plaats worden specifieke genen gekloond in moleculaire studies om structurele en functionele informatie te verkrijgen en voor DNA-sequentiebepaling. Ook voor de productie van specifieke eiwitten of producten op grote schaal wordt klonen veel gebruikt.
Kloonprocedure
De basisstappen van de kloonprocedure zijn als volgt.
- Identificatie en isolatie van het gen van belang. (Amplificatie van het gen van belang door PCR).
- Restrictiedigestie van het gen van belang (restrictie-endonuclease knipt het gen).
- Restrictiedigestie van het vector-DNA. (Vector-DNA wordt ook geknipt met hetzelfde restrictie-endonuclease).
- Invoeging van het gen in de vector en vorming van het recombinante molecuul.
- Transformatie van de recombinante vector in een gastheerbacterie.
- Isolatie en identificatie van de getransformeerde bacteriën (plasmidevector moet een selecteerbaar gen bevatten, meestal een antibioticumresistentiegen om getransformeerde bacteriën te screenen).
- Recombinante genexpressie binnen de gastheer.
Figuur_01: Procedure voor klonen
Wat is subklonen?
Subklonen is een procedure waarbij een interessant gen van de ene vector naar de andere vector wordt verplaatst om de expressie van het gen te zien om de gewenste functionaliteit van het gen te verkrijgen. Bij deze methode zijn twee vectoren betrokken; namelijk bovenliggende vector en bestemmingsvector. Gekloonde inserts worden weer verplaatst naar een tweede vector bij subklonen. Het doel van het overbrengen van het gen van de eerste vector naar de tweede vector is om iets te verkrijgen dat niet kon worden gedaan door de eerste vector of om een gen weer te scheiden binnen het reeds gekloonde fragment van DNA en het alleen tot expressie te brengen. Bij deze procedure worden in het begin restrictie-enzymen gebruikt.
Procedure voor subklonen
De basisstappen van subklonen zijn als volgt.
- Met behulp van restrictie-endonucleasen, scheiding van het DNA van belang in het donorplasmide (oudervector).
- Amplificatie van het DNA van belang met behulp van PCR.
- Zuivering van het PCR-product (DNA van belang) door middel van gelelektroforese.
- Opening van het ontvangende plasmide door dezelfde restrictie-endonucleasen die worden gebruikt om van belang zijnde DNA in het ouderplasmide te scheiden.
- Ligatie van het DNA van belang (gen) in het ontvangende plasmide om het gesubkloneerde plasmide te creëren.
- Transformatie van de gesubkloneerde vector in een competente gastheerbacterie.
- Screening van getransformeerde cellen.
- Zuivering van het plasmide-DNA en gebruik voor DNA-sequentiebepaling of expressie van de genen om de gewenste producten te verkrijgen.
Subklonering wordt uitgevoerd bij gelegenheden waarbij één gen wordt geïsoleerd uit de gekloonde groep genen of wanneer het gen van belang moet worden overgebracht naar een bruikbaar plasmide om de exacte functie van het gen van belang te zien.
Figure_02: Procedure voor subklonen
Wat is het verschil tussen klonen en subklonen?
Diff Artikel Midden voor Tafel
Klonen versus subklonen |
|
| Klonen is de procedure waarbij genetisch identieke organismen of cellen worden geproduceerd. | Subklonen is een procedure waarbij een interessant gen van de ene vector naar de andere vector wordt verplaatst om de expressie van het gen te zien om de gewenste functionaliteit van het gen te verkrijgen. |
| Werkwijze | |
| Scheid het DNA van belang van het organisme en één keer in een vector ingevoegd en gekloond | Reeds gekloond DNA wordt gescheiden van de eerste vector en in een tweede vector ingevoegd en gekloond. |
| Voeg beweging in via vectoren | |
| Verplaatst geen inserts (DNA van belang) van de ene vector naar een andere vector. | Verplaats inserts van bovenliggende vector naar bestemmingsvector. |
Samenvatting - Klonen versus subklonen
Klonen creëert genetisch identieke cellen of organismen met het ingevoegde gen of DNA van belang. Het verloopt door de scheiding en insertie van het van belang zijnde DNA in een vector en expressie in een gastheerbacterie. Subklonen deelt dezelfde stappen als klonen. Bij subklonen wordt echter al gekloond DNA-fragment (gen van belang) in een vector ingebracht en getransformeerd in een gastheerbacterie. Dat is het belangrijkste verschil tussen klonen en subklonen.
