Belangrijkste verschil - cDNA versus genomische bibliotheek
Er zijn twee hoofdtypen DNA-bibliotheken die zijn geconstrueerd door wetenschappers met behulp van genetische manipulatietechnieken. Dat zijn de cDNA-bibliotheek en de genomische bibliotheek. Het belangrijkste verschil tussen cDNA en genomische bibliotheek is dat cDNA-bibliotheek het gekloonde complementaire DNA van totaal mRNA van een organisme bevat, terwijl de genomische DNA-bibliotheek de gekloonde fragmenten van het gehele genoom van een organisme bevat. De genomische DNA-bibliotheek is groter dan de cDNA-bibliotheek.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is cDNA-bibliotheek
3. Wat is genomische bibliotheek
4. Vergelijking zij aan zij - cDNA versus genomische bibliotheek
5. Samenvatting
Wat is een genomische bibliotheek?
Een genomische DNA-bibliotheek is een verzameling klonen die de fragmenten van het totale genomische DNA van een organisme bevatten. Het bevat het volledige genomische DNA van dat organisme, inclusief coderende en niet-coderende sequenties. De constructie van een genomische bibliotheek wordt uitgevoerd door de recombinant-DNA-technologie gevolgd door klonen (genetische manipulatie). Er zijn verschillende stappen betrokken bij de constructie, zoals weergegeven in figuur 01. Het proces begint met de genomische DNA-isolatie. Met behulp van een geschikt DNA-extractieprotocol moet het totale genomische DNA van een organisme worden geïsoleerd. Vervolgens moet het DNA worden omgezet in beheersbare groottes of in de specifieke fragmenten door restrictie-endonucleasen (DNA-snij-enzymen). Gefragmenteerd DNA moet in vectoren worden ingebracht met behulp van DNA-ligasen (DNA-verbindende enzymen). Een vector is een zichzelf replicerend organisme. Plasmiden en bacteriofagen zijn veelgebruikte vectoren in de recombinant-DNA-technologie. Deze geligeerde vectoren staan bekend als recombinante DNA-moleculen omdat ze zowel eigen als ingevoegde DNA-sequenties dragen. Recombinante vectoren worden aan een gastheerbacterie toegevoegd en gemaakt om de recombinante vectoren in de bacteriële cel op te nemen. Bacteriën met recombinante vectoren (plasmiden) moeten in een kweekmedium worden gekweekt. Tijdens de bacteriële vermenigvuldiging repliceert bacterieel DNA, samen met recombinante plasmiden, hun genomen en produceert het klonen. Deze klonen bevatten het volledige genoom van het bronorganisme. Daarom wordt het een genomische bibliotheek genoemd. Plasmiden kunnen gemakkelijk worden gescheiden van het bacteriële chromosomale DNA om de genomische bibliotheek van dat organisme te construeren. Als een bepaald organisme geïnteresseerde genen bevat,het is gemakkelijk te detecteren in de genomische bibliotheek door hybridisatie met behulp van moleculaire probes (markers).
Genomische bibliotheken zijn belangrijk om de genomische structuur en functie, specifieke genen, genlocatie, gen mapping, mutaties, gensequentiebepaling, identificatie van nieuwe therapeutische genen enz. Te bestuderen.
Figuur_1: constructie van een genomische bibliotheek
Wat is een cDNA-bibliotheek?
Een cDNA-bibliotheek is een verzameling complementaire DNA-klonen (cDNA) die zijn gesynthetiseerd uit totaal mRNA van een organisme. De bouwprocedure omvat verschillende stappen. Zuivering van totaal mRNA uit een organisme is de eerste betrokken stap. Geïsoleerd mRNA wordt omgezet in cDNA-strengen door een proces dat reverse transcriptie wordt genoemd. Omgekeerde transcriptie wordt mogelijk gemaakt door een enzym dat reverse transcriptase wordt genoemd. Het gebruikt een kleine 3'-primer en initieert de synthese van de eerste cDNA-streng die complementair is aan de template-mRNA-streng. Het resulterende dubbelstrengs cDNA wordt met behulp van restrictie-endonucleasen in kleinere fragmenten omgezet en in geschikte vectoren ingevoegd. Deze geconstrueerde recombinante moleculen worden vervolgens toegevoegd aan een gastheerorganisme en gekweekt in een kweekmedium om klonen te produceren. De verzameling klonen die cDNA-fragmenten van een organisme bevatten, staat bekend als een cDNA-bibliotheek. Volledig gesneden volwassen mRNA bevat geen introns en regulerende regio's. Daarom zijn niet-coderende fragmenten niet aanwezig in cDNA-bibliotheken, in tegenstelling tot een genomische bibliotheek.
cDNA-bibliotheken zijn belangrijk voor de analyse van coderende regio's, genfuncties, expressie van genen enz.
Figuur_2: constructie van een cDNA-bibliotheek
Wat is het verschil tussen cDNA en Genomic Library?
Diff Artikel Midden voor Tafel
cDNA versus genomische bibliotheek |
|
| cDNA-bibliotheek is een verzameling van de klonen die het complementaire DNA dragen aan het mRNA van een organisme | Genomische bibliotheek is een verzameling van de klonen die het totale genomische DNA van een organisme dragen. |
| Codering versus niet-coderende reeksen | |
| cDNA-bibliotheek bevat alleen de coderende sequenties; het bevat geen introns. | Genomische bibliotheek bestaat uit het volledige genomische DNA inclusief niet-coderend (introns en regulerend) DNA. |
| Grootte | |
| cDNA-bibliotheek is klein. | Genomische bibliotheek is groot. |
| Start materiaal | |
| Uitgangsmateriaal is mRNA | Het uitgangsmateriaal is DNA. |
| Betrokkenheid van reverse transcriptie. | |
| Omgekeerde transcriptie vindt plaats in de eerste cDNA-strengsynthese. | Omgekeerde transcriptie gebeurt niet. |
Samenvatting - cDNA en genomische bibliotheek
De genomische bibliotheek vertegenwoordigt een populatie van klonen die het gefragmenteerde totale genomische DNA van een organisme dragen. cDNA-bibliotheek vertegenwoordigt de populatie van klonen die complementair DNA van het totale mRNA van een organisme dragen. Een cDNA-kloon bevat alleen de sequenties die in mRNA worden aangetroffen, terwijl de genomische kloon de sequenties van het volledige genoom bevat. Dit is het verschil tussen cDNA en genomische bibliotheek.
