Belangrijkste verschil - Nitrocellulose versus nylon membraan
Blotting is een belangrijke techniek voor de detectie van specifieke sequenties van DNA, RNA en eiwitten uit hun mengsels in de moleculaire biologie. Het wordt gedaan met behulp van een membraan dat blot wordt genoemd. Er zijn verschillende blottingtechnieken, zoals Northern, Southern en Western blotting. Het selecteren van een geschikt membraan voor het blotproces moet zorgvuldig gebeuren om niet-specifieke binding en verkeerde detecties te voorkomen. Nitrocellulose, nylon en PVDF zijn veelgebruikte membranen bij blottingtechnieken. Ze hebben verschillende kenmerken. De belangrijk verschil tussen nitrocellulose en nylon membraan is dat nitrocellulosemembranen een hoog eiwitimmobilisatiepotentieel hebben, terwijl nylonmembranen een hoog nucleïnezuurimmobilisatiepotentieel hebben. Beide soorten membranen worden echter vaak gebruikt bij blottingtechnieken.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is een nitrocellulosemembraan
3. Wat is een nylon membraan
4. Vergelijking zij aan zij-nitrocellulose versus nylon membraan
5. Samenvatting
Wat is een nitrocellulosemembraan?
Nitrocellulosemembraan is een veelgebruikt membraanfilter in nucleïnezuur- en proteïneblottingstechnieken. Het heeft een hoog potentieel voor eiwitbinding. Daarom worden nitrocellulosemembranen veel gebruikt in de Western-blotting-techniek. Nitrocellulosemembranen zijn compatibel met alle hybridisatietechnieken en vertonen superieure bindingscapaciteiten zonder interferenties. Nitrocellulosemembranen zijn van nature hydrofiel van aard. Ze maken een hydrofiele interactie met moleculen en immobiliseren ze efficiënt op het membraan. Commerciële nitrocellulosemembranen zijn verkrijgbaar in twee poriegroottes: 0,45 en 0,2 µm.
Figuur 01: Nitrocellulosemembraan gebruikt bij western blotting
Wat is een nylon membraan?
Nylonmembraan is een ander type commercieel membraan dat wordt gebruikt in blotechnieken. Het wordt ook gebruikt met nitrocellulosemembranen voor blotting in het zuiden en noorden. Nylonmembranen zijn ideaal voor Southern blotting dan nitrocellulose vanwege hun hoge affiniteit voor binding met DNA. Vanwege verschillende unieke kenmerken van nylon membranen, gebruiken onderzoekers vaak nylon membranen voor Southern en Northern blotting in plaats van over nitrocellulosemembranen. In tegenstelling tot nitrocellulose worden ook nylonmembranen aanbevolen voor strippen en reprobing.
Figuur 02: Nylon membraan gebruikt voor Southern blotting
Wat is het verschil tussen nitrocellulose en nylon membraan?
Diff Artikel Midden voor Tafel
Nitrocellulose versus nylon membraan |
|
| Nitrocellulosemembranen zijn broos. | Nylon membranen zijn minder broos. |
| Afhandeling | |
| Ze zijn moeilijk te hanteren. | Ze zijn gemakkelijk te hanteren. |
| Reprobing | |
| Niet-ondersteunde nitrocellulosemembranen zijn moeilijk opnieuw te meten. | Reprobing is eenvoudig met nylon membranen. |
| Compatibiliteit met verschillende opslagomstandigheden | |
| Nitrocellulosemembranen hebben minder sterkte om verschillende opslagomstandigheden te weerstaan. | Nylon membranen reageren robuuster op verschillende opslagomstandigheden. |
| Gebruik | |
| Voorbevochtigen is vereist. | Voorbevochtiging is niet vereist voor nylon membranen. |
| Hydrofiele aard | |
| Nitrocellulosemembranen zijn hydrofiel van aard, maar zijn minder hydrofiel dan nylonmembranen. | Ze zijn sterk hydrofiel van aard. |
| Immobilisatiepotentieel | |
| Nitrocellulosemembranen hebben minder affiniteit voor nucleïnezuren. Maar het heeft een hoge affiniteit voor eiwitten. | Nylonmembranen hebben een hoog bindingspotentieel met nucleïnezuren dan nitrocellulosemembranen. |
Samenvatting - Nitrocellulose versus nylon membraan
Nitrocellulose- en nylonmembranen zijn speciale vellen die worden gebruikt in de vloeitechniek om het strepenpatroon op de gel te reproduceren. Ze maken het mogelijk om een specifieke sequentie of een eiwit uit de mengsels te detecteren door ze op het membraan te immobiliseren. Zodra de moleculen op het membraan zijn geïmmobiliseerd, kan het worden gebruikt als een substraat voor hybridisatieanalyse met gelabelde probes. Nitrocellulosemembraan wordt vaak gebruikt voor eiwitdetectie in western blotting-techniek vanwege de hoge bindingsaffiniteit met eiwitten. Nylon membranen worden vaak gebruikt voor Southern en Northern blotting. Dit is het verschil tussen nitrocellulose en nylon membraan.
